Sommario
Come funzionano le sonde TaqMan?
La sonda dual-labeled più comune è la sonda TaqMan. Tale sonda ibridizza un tratto di genoma interno al frammento di DNA amplificato dalla coppia di primers. Quando i fluorocromi sono legati alla sonda, i fotoni emessi dal Reporter sono assorbiti dal Quencher, che ha minore livello energetico.
Cosa significa attività Esonucleasica 5 3 o 3 5?
L’attività esonucleasica 3′-5′ è anche detta di correzione di bozze, in quanto consente di rimuovere nucleotidi erroneamente appaiati durante la sintesi dei filamenti nuovi nella duplicazione del DNA. Questa funzionalità si riscontra tanto nelle DNA polimerasi batteriche, quanto in quelle eucariotiche.
Dove avviene la trascrittasi inversa?
Dopo esser penetrato nella cellula ospite, il genoma del retrovirus subisce una retro-trascrizione e viene convertito in DNA dall’enzima trascrittasi inversa. La replicazione di questi retrovirus avviene nel citoplasma della cellula infetta.
Qual è la PCR quantitativa in tempo reale?
La PCR quantitativa in tempo reale (anche conosciuta come qPCR) è un modo di scoprire quanto di una sezione specifica di DNA là è in un campione, in tempo reale. Ciò permette che le sezioni di DNA (o, acidi nucleici) siano schermate simultaneamente.
Qual è l’efficienza della PCR?
La quantificazione assoluta può utilizzare dei campioni standard (DNA plasmidico o altre forme di DNA) la cui concentrazione assoluta sia nota. Si deve essere certi, tuttavia, che l’efficienza della PCR sia la stessa per i campioni noti e per quelli incogniti.
Qual è il ciclo di PCR?
Un tipico ciclo di PCR: 1. Denaturazione al calore di uno stampo di DNA (template) che deve essere copiato (93 – 95 °C). Durante la denaturazione la doppia elica si apre a formare singoli filamenti, e ogni reazione enzimatica cessa (ad esempio le reazioni di allungamento). 2.
Come funziona la PCR real-time?
Spesso la PCR real-time è combinata con la PCR Retro Trascrizionale (RT-PCR) per quantificare i livelli di espressione di specifici RNA: la retro-trascrizione (o trascrizione inversa) produce del DNA complementare a singolo filamento detto cDNA (complementary DNA) mantenendo inalterati i rapporti relativi di concentrazione delle diverse specie