Quale è la differenza tra trasformazione e trasfezione?
La trasformazione è l’introduzione di un gene in una cellula procariota (batterica e di lievito), mentre la transfezione è solitamente chiamata introduzione di un gene in una cellula di mammifero.
Cosa sono e perché nella trasfezione di cellule eucariotiche si usano i liposomi?
Con un processo ancora non ben noto le cellule legano il precipitato e permettono l’ingresso del DNA. Un altro metodo biologico molto efficace sfrutta i liposomi, piccole vescicole lipidiche che inglobano il DNA e sono indotte ad entrare con esso nella cellula simulando i processi di endocitosi cellulare.
A cosa servono i geni reporter?
reporter, gene In genetica molecolare , sequenza di DNA il cui prodotto (proteina r.) si può riconoscere mediante saggi in vitro. Serve a identificare le sequenze di DNA preposte alla regolazione dei geni.
Cosa significa lisi cellulare?
La lisi cellulare si riferisce alla rottura di una cellula per accedere al fluido intracellulare, o lisato.
Come si formano i liposomi?
Quando i fosfolipidi si disperdono in un mezzo acquoso, avviene una riorganizzazione delle molecole di acqua per cui aumenta l’energia libera. Per minimizzare questo costo energetico, la parte idrofoba dei fosfolipidi si aggruppa in modo che il numero di molecole di acqua gravato sia il minimo.
Perché è importante la presenza di un gene reporter all’interno del tratto di DNA che verrà inserito nel vettore?
I geni reporter sono spesso usati come indicatori per valutare il successo della transfezione ovvero mettono in evidenza se un determinato gene è stato acquisito dalle cellule prese in considerazione e se il suddetto gene viene espresso correttamente.
A cosa serve la luciferasi?
Dapprima è stata usata per misurare la quantità di ATP all’interno delle cellule, infatti se queste si illuminano deve essere presente ATP. In seguito, la luciferasi è stata usata legata ad altre proteine che così potevano essere individuate all’interno di organismi viventi.
Come si produce una proteina ricombinante?
Per ottenere proteine ricombinanti occorre clonare il gene che codifica per la proteina in particolari ‘vettori di espressione’ che contengano i segnali necessari per l’inizio della trascrizione e della traduzione. La scelta del sistema cellulare dipende dal tipo di proteina ricombinante che si vuole ottenere.
Cosa accade alla cellula ospite una volta ricevuto il DNA ricombinante?
Una volta inserito il gene selezionato, il plasmide diventa il vettore che può trasportare il gene in altre cellule. I batteri che hanno ricevuto il gene estraneo vengono fatti crescere in un terreno di coltura adatto in modo che si riproducano.